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【全文阅读】:玉米淀粉合成酶SSⅡa启动子的克隆及功能分析

玉米淀粉合成酶SSⅡa启动子的克隆及功能分析

  • 《华南农业大学学报》
  • 发表时间:2017年1期
  • 陈展宇,王阔,王晓梅,刘相国,崔喜艳
  • 吉林农业大学农学院

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文章简介

【目的】克隆玉米Zea mays淀粉合成酶SSⅡa启动子,并分析其功能,为进一步研究和应用SSⅡa启动子奠定基础。【方法】通过NCBI上公布的玉米基因组序列,在网站MaizeGDB上BLAST查找到SSⅡa5′侧翼序列,利用PCR方法从玉米B73中克隆SSⅡa启动子;通过PlantCare在线分析启动子顺式作用元件,用特异性引物分别克隆出长度为1407、867、633、483和365bp的片段,与植物表达载体pCAMBIA3301连接,构建5种5′缺失体的植物表达载体,命名为P1、P2、P3、P4和P5。用农杆菌介导法转化拟南芥Arabidopsis thaliana,获得转基因拟南芥。【结果】以玉米B73基因组DNA为模板,用特异性引物SSⅡaF/SSⅡaR进行扩增,得到2526bp序列;除草剂筛选的阳性拟南芥植株PCR验证均检测出gus基因;GUS组织化学分析表明,5种类型启动子构建的表达载体在成熟期叶片、果荚中均显蓝色;gus基因定量分析表明,成熟期5种转基因拟南芥叶片中,gus基因表达量P1最高,其他基本一致;种子中gus基因表达量P1和P2相近,且高于P3、P4和P5。【结论】成功克隆玉米SSⅡa启动子;构建的5种SSⅡa启动子缺失体表达载体在转基因拟南芥中均具有活性,长度为1407bp(P1)和867bp(P2)的启动子具有胚乳特异性。

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